液相色譜儀由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。流動(dòng)相有氣泡,會(huì)使液相泵的壓力升高,影響泵的運(yùn)行,氣泡運(yùn)行到檢測(cè)器,壓力過高也會(huì)損壞檢測(cè)器,會(huì)在色譜圖上出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺,所以在在使用之前脫去流動(dòng)相中溶解進(jìn)的空氣,把影響降低。
液相色譜儀常用的脫氣方法有如下幾種:
1、吹氦脫氣法:這種脫氣方法雖然好,但我們國(guó)內(nèi)氦氣價(jià)格較高,很少有實(shí)驗(yàn)室采用此方法。
2、加熱回流法:此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會(huì)丟失,混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。
3、抽真空脫氣法:此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa 即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性,因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。
4、超聲波脫氣法:將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗器中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果較差。
5、在線脫氣法:在線脫氣使用簡(jiǎn)單,低故障,有效。
液相色譜儀與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。